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本文標(biāo)題："細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的載玻片上的遷移速度實(shí)驗(yàn)"
新聞來(lái)源：未知 發(fā)布時(shí)間：2017-3-16 17:25:26 本站主頁(yè)地址：http://m.vndmy.cn
細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的載玻片上的遷移速度實(shí)驗(yàn)
按一定密度將細(xì)胞加于牽引實(shí)驗(yàn)底物上，不要使細(xì)胞互相接觸，但
應(yīng)加入足夠于測(cè)量的細(xì)胞。在室溫條件下培養(yǎng)1～3 h，直至細(xì)胞恢復(fù)正
常形態(tài)和遷移速度。將細(xì)胞懸液注在二甲聚硅氧烷膜一側(cè)，使其流向另
一側(cè)，以便迅速覆蓋二甲聚硅氧烷膜。此步驟引起的膜破裂最少。正常
的遷移速度常指在涂布一層某種細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的載玻片上的遷移速
度。6．將盛有細(xì)胞的Petri皿放于顯微鏡載物臺(tái)(可實(shí)現(xiàn)溫度控制)上，
記錄細(xì)胞對(duì)二甲聚硅氧烷膜產(chǎn)生的皺褶。先記錄圖像視野的校準(zhǔn)尺度，
然后以此校準(zhǔn)尺度直接測(cè)量皺褶長(zhǎng)度，或用裝有圖像捕獲器和圖像分析
軟件的計(jì)算機(jī)測(cè)量。7．將鋪有底物的蓋玻片(無(wú)細(xì)胞)封固于含有培養(yǎng)
液的Petri皿內(nèi)，再將培養(yǎng)皿放于裝有錄像系統(tǒng)顯微鏡的載物臺(tái)上。然
后，將帶有持針器的顯微操作儀安置在合適位置，以便針尖可達(dá)理想視
野的中央。8．將已校準(zhǔn)的微型針固定于顯微操作儀內(nèi)，用顯微操作儀
將微型針在二甲聚硅氧烷膜上向側(cè)面移動(dòng)，直至產(chǎn)生皺褶，這些皺褶比
細(xì)胞產(chǎn)生的皺褶短或長(zhǎng)。9．通過校準(zhǔn)的錄像記錄，確定針尖產(chǎn)生皺褶(
長(zhǎng)度)時(shí)的移動(dòng)距離。記錄錄像視野的校準(zhǔn)尺度，然后按此視野尺度計(jì)
算針尖產(chǎn)生皺褶前后的移動(dòng)距離(同步驟6)。10．對(duì)于每條皺褶的長(zhǎng)度
，應(yīng)按針的不易移動(dòng)性(見支持方案1)和偏向計(jì)算產(chǎn)生皺褶的力，由此
得出力一皺褶長(zhǎng)度曲線。11．用步驟10得出的力一皺褶長(zhǎng)度曲線計(jì)算產(chǎn)
生皺褶(步驟6測(cè)量的)需要的力。支持方案1 校準(zhǔn)微型針材料直徑為25
tzm的鎳鉻熱電偶線(omega engineering)移液管拉制器(David Kopf i
nstruments)各種直徑和壁厚的Pyrex毛細(xì)玻璃管(drummond scientific
)小顯微鏡，光軸平行于工作臺(tái)目鏡網(wǎng)格(edmund scientific)，校準(zhǔn)尺
度適合于顯微鏡的目鏡。1．剪一段直徑為259m的鎳鉻線(長(zhǎng)約30 cm)，
然后稱重，并仔細(xì)測(cè)量長(zhǎng)度。根據(jù)此重量／長(zhǎng)度比率，得出較短一段鎳
鉻線(將用于步驟3)的質(zhì)量。
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