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電融合技術(shù)的原理-細胞融合技術(shù)分析
顯微鏡
電融合技術(shù)的原理在于,懸于大小不同的兩平行電極間伊低導
電率溶液中的細胞,在1—100MHz和100—1000V/cm交流電場中,會
向小電極移動,并極化成偶極子,而沿電場力向排列成串,此時再
加上適當強度和持續(xù)時間的高壓電脈沖,即可使相鄰細胞膜的接觸
區(qū)產(chǎn)生可逆電擊穿,從而觸發(fā)細艙融合。
由了電融合技術(shù)具有融合率甚高,可達50—80%,以及可在顯
微鏡下定向誘導細胞融合和可直接挑選雜種細胞等優(yōu)點,因而正日
益引起人們的重視。目前已有商品電融合器出售。為能在某些環(huán)節(jié)
上進一步加以改進和發(fā)展,則可望具有十分誘人的應用前景。
雜種細胞的篩選:在上述融合條件下,并非所有的細胞都能融
合。例如在以PEG作為融合劑時,大約只有十萬分之一的細胞最終
能夠形成會增殖的雜種細胞。再加,細胞融合本身又帶有一定的隨
機性,除不同親本細胞間的融合外,還伴有各親本細胞的自身融合
。因此,在緊隨細胞融合之后,即須設法把含有兩親本細胞染色體
的雜種細胞分離或篩選出來。
通常面臨的問題,則是須從大量快速增殖的親本細胞中分離出
少量生長緩慢的雜種細胞。最簡便的辦法無疑是應用選擇培養(yǎng)基,
使親本細胞死亡,而僅讓雜種細胞存活下來。為此,已先后利用親
本細胞的藥物抗性、營養(yǎng)缺陷型和溫度敏感性等遺傳標記,建立了
多種選擇系統(tǒng),并已成功地用于雜種細胞的篩選。此外,在融合前
用人工標記親本細胞,或以致死劑量的生化阻抑劑來處理親本細胞
,也是一種較為有效的篩選辦法。、
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