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生物成像領域另一個重要的發(fā)展是把近場和遠場集成在一起以增加成像的
動態(tài)范圍。在同一個設備的內部進行近場和遠場之間的切換,即可以獲得高分
辨力小區(qū)域掃描,也可以獲得大區(qū)域遠場圖像。一些組合了近場
顯微鏡和共聚
焦顯微鏡的商用設備已經(jīng)在市場上出售了。
熒光壽命成像顯微術,通常略寫成FI.1M,能夠提供細胞內或者組織的熒光
壽命的空間分布(Tadrous, 2000; Bastiaens&匆uire, 1999).利用熒光劑的熒
光壽命作為增強對比的機制,相對穩(wěn)態(tài)熒光顯微術來說有很多優(yōu)勢。首先,熒光
壽命對熒光劑的局部環(huán)境高度敏感。這種成像形式所達到的分辨力為研究生命
系統(tǒng)動態(tài)活動提供了可胎。對于上面講到的FRET成像,F(xiàn)LIM有一個優(yōu)勢:由
于供體能量轉移到受體上去了,因此只需要測量供體的熒光壽命,就可以測里其
能量轉移。FLIM還有一個優(yōu)勢,就是它不受熒光強度、濃度的影響,并且最大
程度上與熒光劑的光致漂白無關。而且,盡管某些熒光團的熒光譜相似,但在不
同的環(huán)境下其壽命不同,因此壽命是更加敏感的環(huán)境測試量。FLIM已經(jīng)被用
在多種不同類型的單光子和雙光子激發(fā)成像裝置上,包括多光子標記成像、離子
濃度數(shù)量成像、含氧數(shù)最成像和FRET的能最轉移效率測量(Periasamy等,
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