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細(xì)胞組分的胞內(nèi)pH值測量儀器實驗簡介-細(xì)胞
顯微鏡
獨立細(xì)胞或細(xì)胞組分的胞內(nèi)pH值對了解生物過程是非常重要的,目前已
經(jīng)有測量細(xì)胞懸浮液(Bassnett et al..1990; Buckle:和Jones,1990)或獨立細(xì)胞
的胞內(nèi)pH值的相關(guān)報道。使用“Molecular Probes”公司商用的長波長熒光pH
標(biāo)記物(比如放基Snarf一八E-1染料),利用它的局域化光譜,可以測量細(xì)胞不同
位置的PH值。Snarf-AE-1可以用480~ 550nm波長的光激發(fā),在580nm和
640nm有兩個輻射峰,它們的強(qiáng)度受染料周圍環(huán)境中pH值的影響很大
(Handbook of Fluorescent Probe和Research Product;),Molecular Probes,
Inc. )。很多熒光測量中的誤差(比如由于光漂白,細(xì)胞厚度,儀器不穩(wěn)定,指示
劑滲漏或者分布不均造成的誤差),都可以通過將兩個輻射峰的強(qiáng)度相除獲得比
值來排除.pH值不同,它們的比值也不一樣。需要指出的是,光漂白也是受pH
值影響的,這也會在測量中產(chǎn)生誤差。
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