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本文標題："植物材料以樹脂為基質(zhì)樣品分析圖像顯微鏡"
新聞來源：未知 發(fā)布時間：2019-3-31 23:07:16 本站主頁地址：http://m.vndmy.cn
植物材料以樹脂為基質(zhì)樣品分析圖像顯微鏡
Rogers(1994)和Yang等(1997b)已經(jīng)對來自于化石或者陳舊材料中DNA
的提取技術作了綜述。盡管他們的結論來自于動物的軟組織或者硬組織材
料，但Yang等(1997b)的大體結論也適用于植物材料，即沒有一種提取方法
總是最好的。一般地講，一種以樹脂為基質(zhì)的提取方法，DNA吸附在硅膠上
，而蛋白類、脂類、多糖類被洗掉，這樣可以產(chǎn)生較干凈的提取物，但產(chǎn)
率一般低于用去污劑／酶消化和乙醇沉淀的產(chǎn)率。另外，雖然沉淀法的產(chǎn)
率，特別是添加共沉淀時，DNA片段的長度范圍大于用特定洗脫液和樹脂所
產(chǎn)生的DNA的片段，DNA片段的大小也影響硅膠提取或乙醇沉淀的產(chǎn)率。因
此，本章將詳細地描述我們經(jīng)常使用的以去污劑為基質(zhì)的沉淀提取方法，
對于其它的方法，作者可以參閱上面提到的文章或參考文獻，我也向讀者
建議去參考分子研究中心(Molecular ResearchCenter)的植物提取液和程
序(DNAzol ES)，這種方法對從某些材料中提取DNA的效果比較好，該方法
用于從老鼠糞便植物材料中提取DNA時，部分(但不是全部)效果很好(Golen
berg&Nizon，未發(fā)表)。
全部工作區(qū)域在提取之前必須用0．5％的次氯酸鈉溶液擦洗�；�
料可以在0．5％的次氯酸鈉溶液中蘸一下進行表面消毒，然后用蒸餾水徹
底浸洗。但是如果將要研究的是非細菌或真菌的特有基因，這種消毒并不
是絕對必須的。除去有機質(zhì)后，然后將樣本在提取緩沖液中研成粉末。最
好直接在一次性的小離心管內(nèi)用一次性的塑料碾槌(杵)直接磨碎組織以降
低外源污染或交叉污染，這可以手工操作或者在研杵上連接一個鉆孔機進
行研磨。當既不可能得到滅菌設備，并由于材料太硬又不可能用塑料研杵
研磨時，也可以用瓷制研缽和研杵，但必須按上述的方法用次氯酸鈉溶液
和UV進行處理。提取液中包含2％CTAB，7．4MNaCI，20mMEDTA(pH 8．0)，
100mMTrisHCI(pH 8．0)，1％PVP(MW二40000)，4mMDEDTCA和5mMascorbica
cid(Bickel&Golenberg，未發(fā)表)。 這是改進的Golenberg(1993)提取液
，其中加了兩種抗氧化劑：DEDTCA和Ascorbicacid。最終提取液的體積為0
．7mI，樣品在65℃溫育至少]小時。然后10000g離心10分鐘來沉淀固
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