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本文標(biāo)題："GFP熒光和細(xì)胞活力分析圖像顯微鏡的應(yīng)用"
新聞來源：未知 發(fā)布時(shí)間：2017-8-14 20:20:46 本站主頁地址：http://m.vndmy.cn
GFP熒光和細(xì)胞活力分析圖像顯微鏡的應(yīng)用
GFP熒光和細(xì)胞活力
采用GFP對細(xì)菌標(biāo)記已成為一個(gè)普通的方法，然而一個(gè)棘手的
問題卻很少引起人們的注意，即GFP及其變種能否指示細(xì)胞活力。
也就是，在顯微鏡下觀察到的所有發(fā)出熒光的GFP標(biāo)記細(xì)胞是否都
可以認(rèn)為是活細(xì)胞?Lowder等報(bào)告說，Pseudomonas刀uo-rescens的
死亡細(xì)胞與GFP從細(xì)胞泄露之間存在很強(qiáng)的相關(guān)性。大多數(shù)死細(xì)胞(
活力染色法)無GFP熒光，有小比例的細(xì)胞雖然死亡但仍具有綠色熒
光[40]。我們將GFP標(biāo)記S. enterica細(xì)胞經(jīng)過高溫、干燥或次氯酸
鈣等致死因素處理后也得到r相似的研究結(jié)果[41]。因此，GFP作為
活細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定的熒光物質(zhì)會因細(xì)菌細(xì)胞死亡而迅速消失。但是，因
為少數(shù)熒光細(xì)胞的生理狀態(tài)不清楚，所以在采用GFP標(biāo)記法分析細(xì)
胞活力時(shí)，最好是再采用另外一種方法來對結(jié)果進(jìn)行確認(rèn)。26.3.3
.4細(xì)菌生理的其他熒光指示劑
盡管很多研究用熒光物質(zhì)作為細(xì)菌呼吸或酶活性指示標(biāo)記來研
究水生環(huán)境下具有代謝活性的細(xì)菌的檢測問題[42,43)，但這些熒
光物質(zhì)很少用于植物上細(xì)菌的活性研究。類似地，通過PH熒光探針
【如5一(和6一)梭基熒光素、BCECF, SNAFL, SNARF] [42.43]的熒
光比率成像和通過GFP[46]可以在單細(xì)胞水平上測定細(xì)菌的胞內(nèi)pH
，但是還不能對植物上細(xì)菌的pH進(jìn)行原位測定。隨著人們對鮮切果
蔬上細(xì)菌酸脅迫存活的日益關(guān)注，類似研究手段將被證明是非常必
要的。此外，在抗微生物研究中熒光探針結(jié)合流式細(xì)胞儀得到了1
‘泛的應(yīng)用。熒光探針技術(shù)和顯微鏡技術(shù)已成功用在去污染劑對植
物上人和植物病原菌的定量影響研究中。
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