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本文標題："食品微生物的檢測-采用不同熒光標記分子"
新聞來源：未知 發(fā)布時間：2017-8-13 18:17:36 本站主頁地址：http://m.vndmy.cn
食品微生物的檢測-采用不同熒光標記分子
分子信標技術(Stratagene, La Jolla, CA)是一種全新的技術
，即將用于食品微生物的檢測之中。在這項技術中，所有的反應會
在同一個試管中完成。分子信標是一個特制的發(fā)夾形的雜交探針，
它用來與目標PCR產物結合。該探針的一端結合了一個熒光基團，
另一端結合了一個熒光淬滅基團。當不存在目標PC R產物時，分子
信標以發(fā)夾形式存在，不會產生熒光信號。當反應生成目標PCR產
物時，分子信標與PCR產物結合從而導致發(fā)夾結構伸展。這時淬滅
基團遠離熒光基團，熒光信號產生并被檢測到。熒光信號的檢測是
與PC R反應同步進行的，實現了目標PCR產物的“實時”檢測，進
一步可證實樣品中目標病原菌的存在。該系統(tǒng)與TaqMan系統(tǒng)具有相
同的效率，不同之處在于分子信標直接檢測PCR產物的存在，而Taq
Man系統(tǒng)只能報告鏈式反應的發(fā)生。采用具有不同熒光標記的分子
信標，可在同一個試管中檢測不同的PCR產物，因此可以對多種目
標病原菌或分子進行“多重分析”。這是一項嶄新的技術，目前尚
未在食品微生物檢測領域普及。
PCR系統(tǒng)的一個主要問題是PCR產物的交叉污染。如果陽性PCR
產物(例如前一次反應得到的沙門菌PCR產物)進人到下次分析的反
應體系中，就會產生假陽性結果。法國巴斯德研究所(Paris, Fran
ce)開發(fā)的Probelia系統(tǒng)試圖在整個PCR反應過程中采用尿啥吮替代
胸腺啥陡，以消除PCR產物的污染。所以反應管中只有A, U, G, C
四種堿基而沒有T。由Probelia系統(tǒng)得到的PC R擴增產物將是AU, G
C配對，而不是常規(guī)的AT, GC配對。PCR產物與微孔板中的已知序列
雜交，從而得以識別。雜交結果的檢測類似于微孔板中ELISA結果
的檢測，也是通過顏色反應顯示出來。
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