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聚合物基質(zhì)的填充物一般用親水性凝膠
色譜法在核酸純化中的應(yīng)用
通常在色譜分析前,需要進(jìn)行裂解后的分離或富集。富集方法
需要使用乙酸銨和聚乙二醇沉淀法來(lái)進(jìn)一步去除宿主蛋白以及小分
子核酸。與此同時(shí),這些方法也在色譜提純前減少了樣本或處理液
體的體積,而分離過(guò)程也同樣需要離心和過(guò)濾以去除細(xì)胞碎片:
色譜法可相對(duì)容易地進(jìn)行優(yōu)化并按比例增大,而且許多質(zhì)粒特
征,如電荷數(shù)和大小可以通過(guò)特定的設(shè)計(jì)得以區(qū)分。
小顆粒留在了凝膠的孔穴里,而大分子則直接通過(guò)排阻色譜法
適用于將小的環(huán)狀DNA與大的質(zhì)粒分離或者將無(wú)機(jī)鹽及一些小分子
從生物大分子中去除,同時(shí)也可去除熒光標(biāo)記反應(yīng)混合物中游離的
熒光標(biāo)記的核酸。排阻色譜法的主要缺點(diǎn)在于在分離限制酶斷片時(shí)
存在上限,單一的凝膠柱并不能提純所有的核酸。
排阻色譜法中常用親水層包裹的網(wǎng)狀聚合基質(zhì)或硅膠顆;|(zhì)
,硅膠顆粒的缺點(diǎn)在于會(huì)通過(guò)吸附造成溶質(zhì)的保留,并可能會(huì)造成
溶質(zhì)分子的降解為降低吸附量,這些硅膠顆粒通常與有機(jī)衍生物反
應(yīng)進(jìn)行修飾:
聚合物基質(zhì)的填充物更常用,一般用親水性凝膠,可使用水溶
液對(duì)核酸進(jìn)行洗脫。這些凝膠是相對(duì)惰性的,其交聯(lián)程度決定了孔
徑的大小葡聚糖、聚丙烯酰胺和瓊脂是三種比較常見(jiàn)的交聯(lián)聚合物
。Amersham Biosciences出售的交聯(lián)葡聚糖,商品名為Sephadex,
其根據(jù)在水中膨脹時(shí)保水量進(jìn)行分類;
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