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復(fù)雜網(wǎng)狀物沉淀質(zhì)粒DNA和小顆粒實(shí)驗(yàn)
顯微鏡
堿性表面活性劑用于質(zhì)粒DNA的處理,堿性pH值可以使染色體D
NA不可逆地變性,而質(zhì)粒則為可逆變性,隨后加入合適的試劑使溶
液變?yōu)橹行。在pH值為中性時,質(zhì)粒DNA能復(fù)性并留在溶液中,而
染色體DNA則會與蛋白和細(xì)胞碎片等其他物質(zhì)形成復(fù)雜的網(wǎng)狀物沉
淀,沉淀物絮凝并在1~2小時內(nèi)成為多孔膠,多孔膠緩慢上浮至
表面,溶液中剩余質(zhì)粒DNA和小顆粒:
盡管表面活性劑提供了一種快速而溫和的細(xì)胞裂解方式,但某
些表面活性劑即使在低濃度下仍會影響PCR過程下純化過程中沒有
被除去的殘留表面活性劑會與DNA一起被洗脫,因此,在PCR之前必
須先清除表面活性劑。
電穿孔
在強(qiáng)電場下使細(xì)胞破裂的方法叫電穿孔。在這種狀態(tài)下,細(xì)胞
膜會發(fā)生劇烈的改變而變得具有呵滲透性。電穿孔的應(yīng)用主要有細(xì)
胞電轉(zhuǎn)化和通過吸收外源DNA或RNA進(jìn)行外加電基岡轉(zhuǎn)移(主要用于
植物、動物、細(xì)菌和酵母菌)。電場在細(xì)胞膜卜產(chǎn)生可滲透的小孔
,核酸就可以通過電滲或擴(kuò)散導(dǎo)入。
在電穿孔過程中產(chǎn)生的小孔可以立即被填上,然而如果電場足
夠強(qiáng).細(xì)胞膜就會產(chǎn)生不可逆的機(jī)械破壞
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