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本文標題："用一種酶酶切然后乙醇沉淀回收DNA分子"
新聞來源：未知 發(fā)布時間：2017-2-26 0:38:57 本站主頁地址：http://m.vndmy.cn
用一種酶酶切然后乙醇沉淀回收DNA分子
DNA的限制性內切核酸酶剪切與DNA片段的回收
對目的DNA分子和載體分子進行酶切以獲得相匹配的末端是DNA
連接的首要條件。酶切可以是單酶切也可以是雙酶切。單酶切操作
比較簡單，只需將限制性內切核酸酶最適的緩沖液、目的DNA和相
應的限制性內切核酸酶混合，用滅菌的ddHzO補足體積，在37℃水
浴1～3h即可。但對于雙酶切，特別是兩種酶所用緩沖液成分不同(
主要是鹽離子濃度不同)或反應溫度不同，操作就顯得復雜一些，
這時可以采用如下措施解決：①先用一種酶酶切，然后乙醇沉淀回
收DNA分子后再用另外一種酶酶切；②先進行低鹽要求的酶酶切，
然后添加鹽離子濃度到高鹽的酶反應要求，加入第二種酶進行酶切
；③使用通用緩沖液進行雙酶切。具體要根據酶的反應要求進行，
盡量避免星號效應。
載體及目的DNA片段經酶切后，如果無多余的片段(如載體單切
)可以用酚／氯仿抽提后，經乙醇沉淀回收用于連接。但多數(shù)還有
多余片段，必須電泳分離后回收目的片段�；厥占瓤梢圆捎玫腿埸c
膠法和凍融法等經典方法，也可以采用商品化的試劑盒。這些商品
化的試劑盒多采用凝膠裂解液(如含有降低熔點的NaI)融化凝膠釋
放DNA后，采用特殊的硅膠樹脂或玻璃奶吸附DNA后，用洗液洗去雜
質，最后用洗脫液洗出DNA，具體操作參見產品說明書。這里僅介
紹低熔點膠法和凍融法兩種經典方法
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