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亞細胞分離的研究可確定一種蛋白質(zhì)是否定位于正確的細胞器中。
在大腸桿菌中,通過對細菌細胞進行滲透壓休克能夠較為容易地獲
得胞質(zhì)中的組分。通過超聲波或采用French壓迫細胞使細胞裂解后
,通過差速離心將細胞膜分離出來。內(nèi)膜和外膜通過等密度蔗糖梯
度離心彼此分開。大腸桿菌的四個亞細胞器(細胞質(zhì)、內(nèi)膜、周質(zhì)
和外膜)會出現(xiàn)交叉污染。特定細胞器中唯一存在的標志蛋白可用
來判斷是否發(fā)生交叉污染及是否分離出正確的細胞器。OmpA是外膜
的標志蛋白;麥芽糖結合蛋白或堿性磷酸化酶前體是胞質(zhì)的標志蛋
白;NADH氧化酶是內(nèi)膜的標志蛋白;6一磷酸葡萄糖脫氫酶是細胞
質(zhì)的標志蛋白。
真核細胞
蛋白質(zhì)向內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中的轉(zhuǎn)運可以通過監(jiān)測酵母細胞中信號肽的
切除和糖基化來確定。
完成細胞膜轉(zhuǎn)運之后,前體蛋白的信號肽被信號肽酶切除。
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