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細胞活性檢測技術
核酸染色技術
健康微型生物細胞的DNA集中在被稱為類核體的區(qū)域。用核酸
染料如DAPI處理后,在
熒光顯微鏡下即可看到類核體。然而DAPI染
色會產生非專一性的結果——和蛋白顆;蚣毎麣報w結合,所以經
典的DAPI染色得到的結果普遍認為偏高。
實驗室里維持在饑餓狀態(tài)、沒有類核體的細菌在被提供營養(yǎng)
物質后,重新獲得了黃色熒光的類核體,相應地,自然樣品在添加
營養(yǎng)后,近20%沒有類核體的細菌又出現(xiàn)了類核體。這些結果顯示
,沒有類核體的細胞可能仍活著,但所含的DNA可能處于一種相對
松散的狀態(tài)或其濃度不夠以致于標準的DAPI染色無法出現(xiàn)陽性結果
。
該技術的核心足除掉DAPI非專一性的染色,尤其是在鹽度高于
12 ppt時,DAPI最有可能與細菌表面結合,而不是穿過細胞膜和DN
A結合(Zweifel&Hagstrom,1995)。將非專一性結合的DAPI去除,
是利用2一丙醇(2一propan01)對DAPI染色的細菌進行洗滌。在去染
色前一定要進行固定,因為這能使細胞膜變得具有剛性,更易于染
色劑的進入。在模糊的藍色熒光的細胞里,帶有類核體的細胞看起
來呈亮的黃點。
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