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本文標(biāo)題："免疫電子顯微鏡( I S E M ) 等技術(shù)被廣泛應(yīng)用于植物病毒診斷"

本試驗(yàn)利用橙綠蛋白質(zhì)染劑染色法 (光學(xué)顯微鏡觀察)、陰染及超薄切片法 (電子顯微鏡觀察) 及血清學(xué)方法
(酵素聯(lián)結(jié)免疫分析法、組織轉(zhuǎn)漬法及西方轉(zhuǎn)漬法) 均能偵測(cè)到罹病組織內(nèi)之 L N V，且反應(yīng)明確。就實(shí)際應(yīng)用而
言，使用酵素聯(lián)結(jié)免疫分析法 ( E L I S A ) 較為迅速又可同時(shí)偵測(cè)較多之樣本，但為保證鑑定之品質(zhì)，經(jīng) E L I S A 初步
診斷之結(jié)果必要時(shí)得再藉由電子顯微鏡直接觀察罹病組織或其他的偵測(cè)方法加予佐證，其結(jié)果可信度會(huì)更高。血清學(xué)方法如 E L I S A、dot-blot immunoassy 及免疫電子顯微鏡( I S E M ) 等技術(shù)被廣泛應(yīng)用于植物病毒診斷 ( 9 , 1 0 , 1 7 , 1 9 , 2 0 , 2 1 )，
其中 E L I S A 幾乎可偵測(cè)每一種植物病毒 ( 9 )。本試驗(yàn)純化L N V 鞘蛋白 (38 kDa) 做為抗原製備兔子抗血清或以 L N V
老鼠單元抗體應(yīng)用于 ELISA, Western blot, direct tissue blot
( D T B ) 及 I S E M (5) 均能有效偵測(cè)到罹病組織內(nèi)之 L N V 抗原，但由于老鼠單元抗體可以不斷地培養(yǎng)供應(yīng)，在實(shí)際應(yīng)
用上更計(jì)具有價(jià)值。
L N V 機(jī)械接種于洋桔梗后，以 D T B 偵測(cè)結(jié)果顯示在高溫 ( 2 6℃) 情況下接種比低溫 ( 2 1℃) 病斑多且病斑較大
(圖五)，此可能說(shuō)明在高溫時(shí)，病毒複製較快且複製之量
較多。在 2 6℃，機(jī)械接種 L N V 于洋桔梗，以 i n d i r e c t
E L I S A 及 D T B 比較其偵測(cè) L N V 之效率，結(jié)果 D T B 于接種
后 1 2 小時(shí)即能偵測(cè)到新複製之病毒，而 indirect ELISA 則
于接種后 4 8 小時(shí)始能明確偵測(cè)到病毒 (表一)，顯然 D T B
能較早偵測(cè)到病毒。E L I S A 雖具有前述之優(yōu)點(diǎn)，但它仍受
限于實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，而 D T B 則不受此項(xiàng)限制，它可于田間
或苗圃立即取樣并進(jìn)行檢測(cè)，由于其能較早期偵測(cè)到病毒
且操作簡(jiǎn)便，對(duì)于抗病毒育種選拔、大量健康種苗生產(chǎn)之
早期發(fā)現(xiàn)病毒，在種苗管理上確具有發(fā)展之潛力及實(shí)用之