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真菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)觀察用微
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許多真菌孢子受限于具有厚層細(xì)胞壁,以現(xiàn)行不同DNA萃取法所得之萃取效率常只有0~30%,
故無(wú)法于微量菌數(shù)下進(jìn)行基因鑒定技術(shù)。目前環(huán)檢所研發(fā)之真菌晶片,受限于空氣中真菌孢子量過(guò)少,
且常用的孢子核酸萃取方法效率差,故目前空氣采樣后之真菌均需先行培養(yǎng)一星期以上,
使菌量擴(kuò)增后才可利用晶片檢測(cè)。
針對(duì)生物晶片檢測(cè)所需步驟進(jìn)行修正,使可檢測(cè)更微量之真菌存在。
以常見(jiàn)Aspergillus fumigatus的分生孢子(conidia)為例,目前自行研發(fā)之檢測(cè)步驟是結(jié)合高功率
之非接觸超音波振盪器(Bioruptor)及核酸萃取試劑組(QuickGene DNA tissue kit)來(lái)純化菌種核酸,
再配合高效能的熱起動(dòng)聚合酶酵素(Hot start Taq DNA polymerase) 放大真菌DNA上的ITS
(internal transcribed spacer)序列后,即可用DNA晶片進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)共需約11個(gè)小時(shí)。
Aspergillus fumigatus分生孢子的晶片檢測(cè)極限,可由先前105降低到102個(gè)孢子左右。
此新建立微量空氣致病真菌之生物晶片檢測(cè)技術(shù),或可將目前空氣檢測(cè)時(shí)間由10天縮短為2天,
且可解決某些菌種因培養(yǎng)不易而無(wú)法偵測(cè)之困境
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