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本文標(biāo)題："電荷耦合元件(CCD)搭配顯微鏡實(shí)時(shí)觀察微觀結(jié)構(gòu)"
新聞來源：未知 發(fā)布時(shí)間：2013-5-9 1:13:47 本站主頁地址：http://m.vndmy.cn
主要是關(guān)于建立一套稜鏡式全反射顯微熒光顯微術(shù)系統(tǒng)，以進(jìn)行單分子研究。全反射顯微術(shù)成功的關(guān)鍵，
在于有效地降低背景熒光值。全反射在界面所建立的漸逝場(chǎng)，其強(qiáng)度為入射光能量的數(shù)倍，并隨離界面的距離增加而呈指數(shù)性衰減，
其滲透深度頗為狹窄，僅侷限于界面附近0.1微米的帶狀區(qū)域，故能選擇性激發(fā)臨近界面的熒光分子。
漸逝場(chǎng)中的熒光標(biāo)記分子經(jīng)激發(fā)所放出的熒光訊號(hào)，經(jīng)高數(shù)值孔徑的物鏡收集后，
分別以電荷耦合元件（CCD）及雪崩式光二極體（APD）偵測(cè)。電荷耦合元件的優(yōu)點(diǎn)在于空間的解析與多個(gè)單分子資訊的同時(shí)擷取，
雪崩式光二極體的優(yōu)點(diǎn)在于時(shí)間解析度，可用于單頻道或雙頻道的光子計(jì)數(shù)，以進(jìn)行時(shí)間系列的解析。
針對(duì)ATP合成酶，本實(shí)驗(yàn)選擇CyDye作為熒光標(biāo)記分子，包括Cy3及Cy5，并采用532nm綠光雷射作為Cy3的激發(fā)光源。
將濃度在10~100pM等級(jí)的CyDye洋菜溶液，旋鍍制成含水達(dá)99%的洋菜膠體薄膜以進(jìn)行系統(tǒng)測(cè)試。測(cè)試的結(jié)果，無論是CCD影像分析，
或是APD光子計(jì)數(shù)量測(cè)，均顯示本實(shí)驗(yàn)所建立的稜鏡式全反射顯微熒光顯微術(shù)系統(tǒng)，確實(shí)具有進(jìn)行單分子研究的能力，
其中最主要的證據(jù)系Cy3單分子單一步驟光淬滅的行為。本實(shí)驗(yàn)的背景熒光值僅每秒約20個(gè)單光子，訊號(hào)背景比值平均在13左右，
最高達(dá)20，且咸信仍有提升空間。在本實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的觀測(cè)下，Cy3熒光單分子在發(fā)生光淬滅之前，約可產(chǎn)生100,000～1,000,000個(gè)光電子訊號(hào)。
單分子實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)確立后，未來將可以生物馬達(dá)為主角，進(jìn)行單分子動(dòng)態(tài)行為分析與動(dòng)力學(xué)研究，包括以Cy3配合Cy3，
進(jìn)行熒光共振能量傳遞（Fluorescence Resonance Energy Transfer）之實(shí)驗(yàn)，以期透過化學(xué)觀點(diǎn)，探討生物馬達(dá)的工作。
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