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針對ATP合成酶,本實驗選擇CyDye作為熒光標記分子,包括Cy3及Cy5,
并采用532nm綠光激光作為Cy3的激發(fā)光源。
將濃度在10~100pM等級的CyDye洋菜溶液,旋鍍制成含水達99%的洋菜膠體薄膜以進行系統(tǒng)測試。測試的結(jié)果,無論是CCD影像分析,
或是APD光子計數(shù)量測,均顯示本實驗所建立的稜鏡式全反射顯微熒光顯微術(shù)系統(tǒng),確實具有進行單分子研究的能力,
其中最主要的證據(jù)系Cy3單分子單一步驟光淬滅的行為。
實驗的背景熒光值僅每秒約20個單光子,訊號背景比值平均在13左右,最高達20,且咸信仍有提升空間。
在本實驗系統(tǒng)的觀測下,Cy3熒光單分子在發(fā)生光淬滅之前,約可產(chǎn)生100,000~1,000,000個光電子訊號。
單分子實驗系統(tǒng)確立后,未來將可以生物馬達為主角,
進行單分子動態(tài)行為分析與動力學研究,包括以Cy3配合Cy3,
進行熒光共振能量傳遞(Fluorescence Resonance Energy Transfer)之實驗,
以期透過化學觀點,探討生物馬達的工作。
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