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豬胚顯微操作技術-一般選擇立體
顯微鏡(10~20倍)即可
體細胞保存及複制技術:
一般而言,整個體細胞復育流程可分為體細胞保種、體細胞核轉置及親緣鑑定。欲保種之種豬,
可取其耳刻組織,置于碎冰中快地寄送到保種之實驗室,經由無菌操作,將組織建立成初代培養(yǎng)之細胞,
所建立之細胞可簡易置于含10%DMSO之胎牛血清冷凍保護液中,置于-80℃冰箱過夜,再移至液態(tài)氮中冷凍保存,
此保種方法不僅簡易,且不限于種公豬,對具優(yōu)良繁殖性能之母豬亦可行。在體細胞核轉置(SCNT)方面,取體內或體外成熟卵母細胞,
藉由顯微操作技術進行卵母細胞核去除,再將供核細胞直接注射至細胞質中,
可得重組豬胚:目前發(fā)展中之徒手法(hand made)在一般解剖顯微鏡(10~20倍)下,以徒手持刀片將豬卵對半截切,再取無極體(無卵細胞核)兩半對夾一顆體細胞進行融合,
取得重組豬胚;再將此等重組豬胚胚移置受胚母豬輸卵管或子宮角上端內,
待母豬完成懷孕,進行SPF剖產或自然分娩複制豬只。在親緣鑑定方面,將體細胞與複制分身之基因體DNA,
進行單核苷酸多態(tài)型與微衛(wèi)星標記之基因型分析,即可確定與其親緣之正確性。
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