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細菌的觀察與培養(yǎng)實驗目的原理和步驟!活細菌觀察用
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(一)目的
把實驗用于日常生活中, 以不同來源的水質(zhì)樣品作材料,檢測水中微生物的數(shù)目與種類,并由培養(yǎng)結(jié)果中觀察各種細菌的菌落型態(tài)。由單一個細菌分裂,繁殖而形成的細菌族群稱為菌落(colony),不同種類的細菌所形成的菌落形態(tài)也各不相同,其形態(tài)指標包括菌落的大小、顏色、氣味、表面光滑或粗糙、邊緣平整或呈鋸齒狀,是否有黏液。因此同學們可以從中了解表面的巨觀判斷與顯微鏡下的觀察作一比較。
(二)原理
本實驗主要是希望同學學習和熟悉生命科學實驗中最基本的微生物操作技術(shù)與方法,了解滅菌、無菌操作、分離方法、純系培養(yǎng)、染色鑑定與計數(shù)的方法。這些技術(shù)將是未來微生物學、分子生物學等等實驗的基礎。
(三)材料 / 設備 / 藥品
Bacto-tryptone
Bacto yeast extract
NaCl
(四)步驟
1. 樣品水洗以振盪混合器(vortex mixer)搖勻。
2. 以pipetman(微量吸管)吸取0.1ml的水滴在培養(yǎng)基上。
3. 浸在酒精中消毒的抹棒先滴掉大部分酒精,再以火焰燒去剩馀的酒精。
4. 抹棒放涼后,把培養(yǎng)基上的水液涂抹均勻。
5. 在培養(yǎng)皿底部標明組別及水的樣品來源。
6. 培養(yǎng)皿的底部朝上,在32℃培養(yǎng),隔日觀察。觀察項目包括培養(yǎng)皿上的菌落數(shù)與菌落形態(tài)。
7. 有興趣的同學取不同菌落的細菌作成抹片后,染色觀察。(方法如第一部分所述)
(五)注意事項
1. 微量吸管的旋轉(zhuǎn)鈕為調(diào)整體積之用, 因應實驗需要調(diào)到100μl(即0.1ml)處,可由刻度窗上看到。其上方按鈕是取放液體時使用,在吸取液體時先在外面壓到第一段之后在伸入液體中取樣,取樣時的動作不可以過大,以免液體上噴后污染微量吸管。為將液體壓出,必須將按鈕壓到第二段,才能把吸入的液體完全排出,第一段與第二段按鈕的感覺可在操作前先行熟悉(旁邊的按鈕則為丟棄吸頭之)。
2. 使用完后抹棒直接放入酒精杯中,不要經(jīng)過火焰,以免引起杯中酒精燃燒。
3. 所有標注字體應寫于底部(有培養(yǎng)基的那部分),以免因蓋錯蓋子而得錯誤結(jié)果。
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