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本文標(biāo)題："廣視域多光子激發(fā)螢光顯微技術(shù)！一臺(tái)顯微鏡多少錢"

              利用同時(shí)空間與時(shí)間聚焦(simultaneouslyspatialandtemporalfocusing)技術(shù)的廣視域多光子激發(fā)螢光顯微技術(shù)(widefieldmultiphotonexcitedfluorescencemicroscopy)有機(jī)會(huì)快速提供活體生物組織的三維(three-dimensional，3D)多光子螢光影像。不同于一般傳統(tǒng)式的多光子螢光顯微術(shù)需要逐點(diǎn)掃描，廣視域多光子顯微技術(shù)僅需要掃描一個(gè)軸向，也就是z軸，藉此去建構(gòu)一個(gè)3D影像。本論文利用Ti:sapphire飛秒雷射振盪器(femtosecondlaseroscillator)當(dāng)作飛秒雷射放大器(femtosecondlaseramplifier)的根本光源(seedingsource)，輸出的120fs脈衝雷射其重覆率(repetitionrate)為10kHz，也將原先的脈衝雷射之能量提升至4.2瓦，而這樣的瞬間極大能量足夠去激發(fā)大于100x100μm2面積的多光子螢光信號(hào)。此外，軸向的解析度可以到達(dá)5μm以下，再利用冷卻式電子倍增感光耦合器(electronmultiplyingchargecoupledevice，EMCCD)照相機(jī)來擷取螢光影像信號(hào)，其幀速率(framerate)依照不同螢光團(tuán)分子的放出效率而有不同的值，其最高可達(dá)數(shù)百Hz。因此具有此飛秒雷射放大器與低溫EMCCD照相機(jī)的協(xié)助，此廣域多光子顯微技術(shù)可以提供非�？焖贁X取活體生物影像，例如可以即時(shí)動(dòng)態(tài)觀測(cè)腦部神經(jīng)細(xì)胞的活動(dòng)以及肝臟的代謝等。目前此系統(tǒng)的縱向解析度可達(dá)將近2.5μm，也利用量測(cè)微米螢光球來推估其側(cè)向解析度達(dá)500nm以下。另外，成功地針對(duì)腦神經(jīng)細(xì)胞組織進(jìn)行多光子螢光3D影像重建，目前使用EMCCD全范圍1000x1000的像素其幀速度最快可達(dá)20Hz。