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本文標(biāo)題："GUS分析之溶解細(xì)胞的步驟！顯微鏡哪有賣找北京上光儀器"
溶解細(xì)胞
8. 于冰上解凍沉淀的細(xì)胞
9. 重新懸浮于374微升之 B-PER™ 細(xì)菌蛋白質(zhì)萃取試劑 (Bacterial ProteinExtraction Reagent – Pierce產(chǎn)品78248) ，與萃取細(xì)菌用的之蛋白酶與磷酸酶抑
制劑混合溶液50微升 (Sigma產(chǎn)品 P8465，配製時(shí)參閱使用說明) ，1微升34mg/ml chloramphenicol (溶于甲醇) ，6微升10mg/ml 溶菌酶 (請以蒸餾水新
鮮製備，大腸桿菌可略去此成分)
10. 漩渦式震盪1分
11. 于冰上靜置5分
12. 此時(shí)，你所得到的是粗製的細(xì)胞溶解混合液，可于下一節(jié)流程中分析GUS活
性所得之活性即以O(shè)D600每單位吸光值下每分鐘產(chǎn)生多少nM的產(chǎn)物表示
(對(duì)Corynebacterium 與 Rhodococcus而言，這是你使用這溶解流程所能獲得的最佳結(jié)果)
13. 針對(duì)大腸桿菌的樣本，將粗製的細(xì)胞溶解混合液離心并置于冰上 1分鐘
14. 此時(shí)，你所有的是清澈的細(xì)胞溶解液(不含細(xì)胞殘?jiān)纳锨逡? 。其蛋白質(zhì)濃度可以Bradford分析法測量 (參考另一個(gè)實(shí)驗(yàn)方法) 。清澈的細(xì)胞溶解液可以
下一節(jié)流程分析其GUS的活性，其活性即以600奈米吸光值下每毫克蛋白質(zhì)產(chǎn)生多少奈莫爾(nM) 的產(chǎn)物表示
(注：每毫克蛋白質(zhì)中的酵素活性是比以O(shè)D600每單位吸光值的酵素活性較好的表示法。想想看)