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酶解制備染色體樣品1.用解剖刀切下固定好的根尖。2.除去
所有堅硬的根冠。3.每個經(jīng)Veetabond處理過的載玻片上放1—3個
根尖,滴一滴檸檬酸緩沖液。
4.用濾紙條吸掉緩沖液,加上一滴酶混合液不要加蓋玻片。
5.將載玻片放人濕潤溫箱。37℃最長可達2h。
6.小心地用一個巴斯德吸出管或者微量移液器吸掉酶液(這時
的根會非常軟),
在解剖鏡下監(jiān)控這一過程。
7.加1滴45%乙酸。根應(yīng)解離。如果有必要,可以輕輕地將根
拉開。
8.在液滴上加上準備好的蓋玻片。
9.用低倍(X10)相差物鏡觀察細胞。如果有必要,可以輕敲蓋
玻片,直到根解
離為單個細胞。預處理可以改善染色體形態(tài)特征,使有絲分裂
同步并積累分裂中期。低溫可以促使染色體收縮而改善大染色體(
例如,洋蔥A///umcepa,蠶豆V/c/a/06e)的形態(tài)特征。在室
溫條件下,不經(jīng)預處理或只進行短時間預處理時,往往是小染色體
(例如,菜豆Phaseolus)反應(yīng)較好。當?shù)谝淮螌δ硞植物種嘗試不
同的預處理條件時,可以在不同的時間間隔取根尖樣品進行檢查。
以獲得最佳的保溫時間,對于原生質(zhì)體懸浮液而言,還有另外的預
處理方法
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