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一般在用蟲(chóng)生真菌免疫抗血清的制備分析實(shí)驗(yàn)
抗血清的制備
1.免疫動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室常用的免疫動(dòng)物有家兔、山羊、豚鼠和雞等。
用于免疫的動(dòng)物應(yīng)適齡、健壯,無(wú)傳染性疾患,最好為雄性。此外還需
十分注意動(dòng)物的飼養(yǎng),以消除動(dòng)物的個(gè)體差異以及在免疫過(guò)程中死亡的
影響。若用兔時(shí)最好一組3只,兔的大小以2—3kg為宜。
2.免疫途徑免疫途徑多種多樣,如靜脈內(nèi)、腹腔內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮
內(nèi)、皮下、淋巴結(jié)內(nèi)等,一般傾向于多途徑免疫,但一次不應(yīng)超過(guò)兩種
途徑。途徑的選擇決定于抗原的生物學(xué)特性和理化特性,如分生孢子一
類(lèi)顆粒狀抗原一般通過(guò)靜脈途徑。
3.免疫佐劑佐劑(adjuvant)又稱(chēng)免疫增強(qiáng)劑,是指與抗原同時(shí)注
射或預(yù)先注射,能非特異性地增強(qiáng)或改變機(jī)體對(duì)抗原免疫反應(yīng)的物質(zhì)。
佐劑能延長(zhǎng)抗原在機(jī)體內(nèi)的存留時(shí)間,并能增加抗原表面積,使抗原與
淋巴系統(tǒng)細(xì)胞充分接觸。常用的有福氏完全和不完全佐劑及明礬佐劑,
其制備方法見(jiàn)張龍翔等。一般在用蟲(chóng)生真菌免疫時(shí),由于抗原來(lái)
源豐富很少用佐劑。
4.免疫程序(以球孢白僵菌為例) 選好2—3婦的健康雄性家兔,
經(jīng)耳緣靜脈進(jìn)行注射。白僵菌孢子注射濃度為107孢子/ml,注射6次;
茵絲體清液的注射濃度為o.1~o.49濕菌體/ml,注射量約為1ml/kg
體重,共免疫4次。免疫完成之后,先抽少量血測(cè)試抗體效價(jià),效價(jià)達(dá)
到試驗(yàn)要求后即可進(jìn)行抽血。如效價(jià)不高還可繼續(xù)加強(qiáng)免疫,直到達(dá)到
要求為止。
測(cè)試效價(jià)時(shí)從耳靜脈抽血或心臟采血1m1以上,用環(huán)狀沉淀或瓊脂
雙擴(kuò)散方法測(cè)定效價(jià)。
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