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不同克隆載體接受外源DNA的程度各不相同
不同克隆載體接受外源DNA的能力各不相同,大小也有一定的限定
范圍。因此,大分子量的染色體基因組DNA分子,必須先片段化成適合
于克隆的DNA片段群體。這樣的DNA片段群體既可以通過(guò)機(jī)械切割,也可
以用核酸限制性內(nèi)切酶消化染色體基因組DNA獲得適當(dāng)大小的DNA片段。
應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄酶從mRNA出發(fā),也可以合成出不同大小的適于基因克隆的eD
NA片段群體。這些DNA片段群體,在體外與選擇好的載體(一般是質(zhì);
噬菌體)連接后.,被導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞。由于載體分子具有抗菌素抗
性基因,所以只有那些獲得了載體分子的細(xì)胞才能在含該抗生素的培養(yǎng)
基上生長(zhǎng)而形成一個(gè)菌落(或噬菌斑),即克隆。如此在細(xì)胞中擴(kuò)增形成
的DNA片段之集合,就是基因文庫(kù)。
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