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本文標題："微生物學入門實驗教學分析圖像顯微鏡"
新聞來源：未知 發(fā)布時間：2017-1-10 17:18:44 本站主頁地址：http://m.vndmy.cn
微生物學入門實驗教學分析圖像顯微鏡
特殊染色方法
負染法(Negative Staining)當標本本身或其中一部分，比如莢膜
，不吸收染料，那么就可以采用負染法。莢膜是一層包圍在許多細菌表
面的多糖物質(zhì)，起到保護宿主的屏障作用。它同時也阻止了染色。在負
染中，微生物周圍背景充滿染料，如墨汁或黑色素(ni—grosin)等酸性
染料。染色結(jié)果并未使菌體本身著色，而使其在暗色背景下保持透亮。
接著用簡單染色或復合染色來顯現(xiàn)出莢膜內(nèi)的細胞。這樣，典型的實驗
結(jié)果是暗背景，透亮莢膜，莢膜內(nèi)是被結(jié)晶紫染成的紫色細胞或被亞甲
基藍染成的藍色細胞。鞭毛染色 鞭毛是某些細菌特有的運動附屬器，
因太細，很難用光學顯微鏡觀察。當需要研究鞭毛的存在和分布時，就
要用費力的鞭毛染色(Flagellar stai—ning)，即用染料或銀等金屬覆
蓋在鞭毛表面。這種技術(shù)操作困難且費時，所以在微生物學入門課程中
常被省略。
芽孢染色 少數(shù)細菌種類能產(chǎn)生稱為芽孢的抗性細胞。芽孢的細胞
壁對普通染料有很強的阻擋作用，因此，經(jīng)過簡單染色，芽孢仍然是透
明的，在細菌細胞中容易辨認。嚴格地講，找一種芽孢染色法(Endo—s
pore staining)來觀察芽孢并不是十分必要。然而，屬在印度墨汁和結(jié)
晶紫復染液形成的暗紅色背景下，莢膜占據(jù)未被染色的透明區(qū)域，細胞
本身被復染液染成了深紫色。圖中細菌是成對排列的肺炎鏈球菌(Strep
tococcus pneumoniae)(3，399×)于復合染色法的Schaeffer—Fulton
芽孢染色法可以使芽孢更易觀察。在熱固定的涂片上覆蓋孔雀綠染色液
，然后溫和加熱直到出現(xiàn)蒸汽。冒蒸汽約5min就可以使孢子壁更易讓染
料透過。不過，現(xiàn)在更新型的染料使用時不需要加熱到冒蒸汽。然后將
載玻片浸在清水中漂洗30s除去細胞其他部位的染料，芽孢上染料被保
留。再將番紅復染液滴在載玻片上，對孢子外區(qū)域或營養(yǎng)細胞染色。無
芽孢的細胞顯紅色；那些芽孢菌則是綠色芽孢和紅色營養(yǎng)細胞。
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