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篩選經(jīng)人工設(shè)計修飾后的質(zhì)粒實驗電子
顯微鏡
防止胞內(nèi)蛋白裂解的另一種方法是開發(fā)利用分泌性載體,在分泌性
載體中,一段信號序列和目標蛋白連接在一起。如果該蛋白質(zhì)能在
一種宿主中被分泌出來,那么至少在使用正確信號序列的情況下,
它通常也能被其他的宿主分泌。將蛋白質(zhì)的天然信號序列(例如,
來自于真核生物的蛋白質(zhì))用宿主專一性的信號序列替代通常能夠
促進分泌。
分泌過程是很復雜的,將一段信號序列和正常的非分泌性蛋白
(例如,胞質(zhì)蛋白質(zhì))連接在一起并不能確保分泌,雖然已經(jīng)報道了
幾個有關(guān)正常胞質(zhì)蛋白質(zhì)分泌的例子。顯然,成熟形式的蛋白質(zhì)含
有分泌過程所必需的“信息”,但是沒有通用的規(guī)則明確規(guī)定,當
一段信號序列和正常的非分泌性蛋白(例如胞質(zhì)蛋白質(zhì))連接在一起
時將導致分泌發(fā)生。
為了確保構(gòu)建過程的遺傳穩(wěn)定性,以及為了對理想的載體一宿
主組合的選擇有所幫助,載體應(yīng)該被設(shè)計成可以在選擇性生長條件
下使宿主存活。最常用的策略是在載體中插入一個編碼抗生素抗性
的基因。常用的克隆質(zhì)粒pBR322含有氨芐西林和四環(huán)素的抗性基因
。在篩選經(jīng)人工設(shè)計修飾后的質(zhì)粒時,多抗性基因是很有幫助的。
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