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本文標(biāo)題："熒光強(qiáng)度的細(xì)胞分析用圖像熒光顯微鏡"
新聞來源：未知 發(fā)布時間：2014-7-5 0:58:44 本站主頁地址：http://m.vndmy.cn
熒光強(qiáng)度的細(xì)胞分析用圖像熒光顯微鏡
對大多數(shù)希望追蹤一個特定蛋白質(zhì)的研究者來說，使用FP需要將日的基因的
cDNA與FP構(gòu)建成融合蛋白載體然后轉(zhuǎn)化到宿主細(xì)胞或整個生物體中。與幾平
所有的GFP變體和珊瑚來源的FP相比.EGFP作為融合蛋白效果最好。因此如果可
能的話，應(yīng)對GFP(或者其他良好的衍生物如Emerald)進(jìn)行預(yù)實驗。在使用其他光
譜區(qū)的FP之前，首先利用GFP優(yōu)化載體策略，從長遠(yuǎn)來看往往證明這是值得的。在
最好的情況下，新的GFP嵌合體及其他光譜區(qū)的衍生變體能使目標(biāo)蛋白行使正常細(xì)胞
功能，同時FP作為標(biāo)記探針報告蛋白結(jié)合位置。然而，這并不總是那么簡單，研究人
員往往懷疑采用不同的FP融合載體策略是否能產(chǎn)生更好的效果。
似設(shè)宿主細(xì)胞是健康的，轉(zhuǎn)染過程不會產(chǎn)生太多的創(chuàng)傷，那么FP工作中遇到的最
常見的問題是熒光信號太弱、聚集化、錯誤定位、融合蛋白無功能以及預(yù)期的熒光強(qiáng)
度被抑制。如果這些問題可以得到解決，研究者必須選擇瞬時表達(dá)還是穩(wěn)定表達(dá)，瞬
時轉(zhuǎn)染的細(xì)胞表達(dá)水平差異很大。而穩(wěn)定表達(dá)需采取更多的時間來選擇穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)
胞群，但往往會產(chǎn)生更好的效果。通常首先考慮(并且更快)用組成性啟動子瞬時表
達(dá)FP融合蛋白，然后選擇低水平熒光強(qiáng)度的細(xì)胞，這些細(xì)胞的表達(dá)水平可能接近內(nèi)源
狀態(tài)而不影響細(xì)胞的正常功能。
然而構(gòu)建穩(wěn)定的細(xì)胞系能定見比較融合蛋白與
對應(yīng)的內(nèi)源蛋白的表達(dá)水平，是更安全的途徑�；蛘咭部赏ㄟ^誘導(dǎo)啟動子來構(gòu)建融合
表達(dá)載體能控制月的蛋自的表達(dá)水平。對于許多樣品來說，可以在內(nèi)源墓因插人FP,
構(gòu)建插人內(nèi)源表達(dá)的FP標(biāo)記，這種方法在模式生物，如醉毋、線蟲和小鼠中的應(yīng)用越
來越廣泛，而幾是定量生物學(xué)實驗的最好方法。
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