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細(xì)胞學(xué)研究實(shí)驗(yàn)研究型高分辨率
顯微鏡-細(xì)胞的結(jié)構(gòu)
固定方法
材料要用新鮮的活組織,用刀片切成小塊,立即投入適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ簝?nèi)固定。組織的大
小因材料而不同,組織切得小,效果比較好。一般方塊狀的組織,每邊的大小以不超過(guò)2
3mm為宜。組織切成的大小和形狀,要根據(jù)材料而定,一方面要注意將來(lái)操作上的方便,更
重要的是制切片要適于結(jié)構(gòu)容易觀察的需要。如固定比較大的組織和器官時(shí),可用其他方
法(如選擇適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ汉脱娱L(zhǎng)固定的時(shí)間)來(lái)解決。
固定液的選擇非常重要。固定液不僅能殺死和固定植物的組織,而且有的固定液還能
改變植物組織和細(xì)胞的結(jié)構(gòu),或者溶解其中某些物質(zhì)。解剖學(xué)和細(xì)胞學(xué)研究用的固定液的
要求不同,固定還影響將來(lái)染色的結(jié)果,說(shuō)明石蠟切片過(guò)程中的許多步驟,互相之間是有
關(guān)聯(lián)的。比較好的方法是一種材料試用幾種固定液固定,比較結(jié)果,累積經(jīng)驗(yàn)。固定液的
濃度,一般是用濃度較低而延長(zhǎng)固定時(shí)間,這樣可使組織邊緣和中間的組織都得到固定。濃
的固定液會(huì)很快地將邊緣一層的組織固定,以致固定液不能再滲透到內(nèi)部而固定中間的組
織。固定液的用量應(yīng)該是固定材料體積的50^-100倍。
組織固定時(shí)要立即除去其中的空氣,因組織中的空氣會(huì)阻止固定液的滲透,而影響固
定的結(jié)果。組織中空氣比較多的材料,往往浮在固定液的表面,可用交替抽氣和放氣的方
法排除空氣,使材料下沉。含有硅質(zhì)較多的材料,如在固定后隨即用5%的氫氟酸處理幾小
時(shí),切片的效果較好。禾本科作物銹病的材料就可以用這種方法處理后切片;木材也能用
這種方法軟化后切片。氫氟酸對(duì)玻璃的腐蝕性很強(qiáng),盛氫氟酸的玻璃器皿,必須涂上一層
石蠟。
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