農(nóng)藥名稱： 

普通名稱：蘇力菌 

生物學(xué)名：Bacillus thuringiensis 

劑型：水懸劑(SC)、可濕性粉劑(WP)、粒劑(GR)、水分散性粒劑(WG)。 

作用：殺蟲劑。 

分析方法： 

1. cry1Ac殺蟲基因轉(zhuǎn)殖螢光假單孢菌的蘇力菌產(chǎn)品： 

1.1.原理：不含活孢子之殺蟲毒蛋白基因轉(zhuǎn)殖螢光假單孢菌的蘇力 菌產(chǎn)品（含Cry1Ac殺蟲蛋白質(zhì)），

無法以NA培養(yǎng)基培養(yǎng)，蛋白 質(zhì)產(chǎn)物可以SDS-PAGE分離及以ELISA確認(rèn)。 

1.2.適用范圍：cry1Ac殺蟲基因轉(zhuǎn)殖螢光假單孢菌的蘇力菌產(chǎn)品。 

1.3.檢驗(yàn)方法： 

1.3.1.供試樣品處理：樣品取0.01g以1 ml無菌水振蕩懸浮稀釋， 再繼續(xù)稀釋至1/1000倍，于1000倍位相差顯微鏡下鏡檢

觀察其菌體及內(nèi)含結(jié)晶之形態(tài)，并在NA（nutrient agar） 平板培養(yǎng)基以劃線法純化，測(cè)試是否可被培養(yǎng)。 

1.3.2.總蛋白量之分析：蘇力菌產(chǎn)品以之蛋白質(zhì)含量含量檢定套 組，以胎牛血清蛋白(BSA)為標(biāo)準(zhǔn)劑，測(cè)定供試蘇力菌總蛋 白濃度，

其后調(diào)整樣品之濃度備用。 1.3.3. SDS-聚丙烯醯胺膠體電泳分析(SDS-PAGE)：將蘇力菌產(chǎn) 品，依Dunn (1993)及段等(1993)之方法，并以Cry1Ac蛋白 質(zhì)為正對(duì)照組，進(jìn)行蛋白質(zhì)成份電泳分離。 

1.3.4.酵素聯(lián)結(jié)免疫檢定(ELISA)檢測(cè)特定毒蛋白含量：經(jīng)1.3.1 定量之蘇力菌樣品及Cry1Ac標(biāo)準(zhǔn)品，以coating buffer稀 釋，使?jié)舛葹?.2-0.5μg/ 50μl，將之加至EIA 96孔盤 中(50μl/孔)，置于37℃，4小時(shí)，倒掉盤中液，每孔加100 μl blocking solution，于37℃作用30分鐘，以washing buffer (0.05% PBST)洗三次，晾干，保存于-20℃?zhèn)溆谩?每 孔加50μl經(jīng)PBS稀釋之Cry1Ac免疫血清，于37℃下，作 用90分鐘，以washing buffer洗三次，加入alkaline phosphatase-conjugated affinity pure goat anti -rabbit IgG (H+L) 2,500倍稀液(100μl/孔)，于37℃下作用60 分鐘，再以washing buffer洗五次，加入0.1% PNPP受質(zhì) 呈色液，于37℃下作用60分鐘，以ELISA判讀機(jī)于405nm下 判讀。 以已知樣品之蛋白含量對(duì)應(yīng)吸光值(OD)求出相關(guān)方程 式，并換算出未知樣品之濃度