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血液中血球之分離
目的 「分類」為人類認(rèn)識大自然生物最基本的法則,想要瞭解人體生命運(yùn)作的奧秘,必須先對細(xì)胞做型態(tài)及功能上的做分類,這些看似簡單的想法,卻是往后探究生命活動的基礎(chǔ)。此實(shí)驗(yàn)是以血液這個(gè)「溷合物」為例子,利用離心的方法分離出各種成分并進(jìn)一步觀察血球細(xì)胞。
原理 血液像河流一樣,主要是水分,就是血液中液體的部分,稱之為血漿(Plasma)。在這流動的液體中也有一些浮游生物,就是紅血球(Red blood Cells)、白血球 (White blood cells)、和血小板(Platelets)等,它們大小不一,形狀不同,數(shù)量也不同。體積以白血球最大、紅血球次之、血小板最;數(shù)量以紅血球最多;白血球有核行動有自主性。由于血液細(xì)胞依不同種類都有其特定的密度,如:紅血球還有大量的血紅素,而血紅素中又含有鐵,因此在血球細(xì)胞中其密度最大,因此利用不同溶液的密度,使細(xì)胞在離心的過程中,會分佈在與其密度相同的溶液介面。粒子在離心時(shí),其 分子量、分子密度、組成、形狀 等,均會影響其沉降速率,沉降係數(shù)即用來描述此沉降性質(zhì);其單位為 S (Svedberg unit),每一種粒子的沉降係數(shù)與其分子密度或分子量成正比。 不同沉降係數(shù)的粒子可利用離心法在密度梯度中作分離。
材料 血液(5ml):前一天預(yù)先抽出,以heparin防止凝血,為各種血球細(xì)胞的來源。
設(shè)備 懸臂式離心機(jī) (直徑10cm)
離心管
玻片
藥品 Ficoll-Paque溶液
食鹽水:低張,等張(約0.4%),及高張溶液
步驟 1. 10ml離心管內(nèi)加入5mlFicoll-Paque溶液,再緩慢的將5ml血液加入離心管。(注意!兩者不能溷合。)
2. 在18℃下,以3000rpm的離心速度,離心30分鐘。
3. 離心后,離心管內(nèi)會分成不同的溶液層。記下所見到的分層
4. 將各層作成玻片標(biāo)本觀察,看各種血球的型態(tài)。
5. 吸取紅血球那一層溶液,分別以低張,等張及高張溶液稀釋十倍后滴一滴在載玻片上,蓋上蓋玻片,以400X觀察紅血球的型態(tài),討論滲透壓對于細(xì)胞的影響。
時(shí)間 約一個(gè)半小時(shí)
備注
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