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本文標(biāo)題："細(xì)菌基因表現(xiàn)的測量"
細(xì)菌基因表現(xiàn)的測量
目的： 利用recombinant DNA技術(shù)去選殖一個基因﹐并測試是否可用載體上的啟動子
(promoter)去表現(xiàn)這個基因。同時，複習(xí)質(zhì)體DNA的純化。
原理：詳見Recombinant DNA
有許多的載體（vector）像是pBlueScript，含有l(wèi)acZ基因N端的部份，這部份往往有
multiple cloning sites，因此，有一段DNA片段插入后，就會造成lacZ基因N端無法產(chǎn)
生，其結(jié)果β-galactosidase的活性就會喪失。
我們就可以利用這一個特性，來幫助我們在做cloning時，作為篩選菌落內(nèi)的細(xì)
菌所代的值體是否有我們要放入的DNA片段。這一方法叫做藍(lán)白挑（blue-white
selection），這的方法缺點有二
器材：
LB+Amp and starch azure plates
Pipetman
37 ℃ incubator
10 mM MgSO4
方法：
1. 星期三下午五至六點,向助教拿有前幾週基因轉(zhuǎn)植的細(xì)菌細(xì)胞，分別將其接種至3
ml的LB + Amp (50μg/ml)的液體培養(yǎng)液中,于37℃下隔夜培養(yǎng)。
2. 取1.5ml 隔夜培養(yǎng)的菌液,小量抽取質(zhì)體并篩檢之。（參照之前的質(zhì)體純化方法-鹼
性溶製法，但省略步驟8-9）。
3. 放到Speed Vac中乾燥10分鐘，用50 µl TE去溶質(zhì)體DNA，取4 µl + 1 µl 的 6X
loading dye.（已加入RNase）。
4. 用電永分析質(zhì)體DNA的大小，以確定是同一質(zhì)體DNA。
5. 將其他隔夜培養(yǎng)的菌液，做10-2, 10-3和10-4稀釋。
6. 各取2ml的三種稀釋液，點在LB+Amp+X-gal, IPTG plates。